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1、细胞铺板根据细胞的生长快慢调整接种数量，原则为过夜后细胞能够长满，切记一定要铺匀。

2、减少划痕距离的误差办法：不同孔之间最好使用同一只枪头；枪头要垂直，不能倾斜，划痕时可比着直尺；保持力度一致，尽量一次性划完。

3、在用 PBS 缓冲液冲洗细胞时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞；为了避免细胞数量和状态受到影响，可用移液枪缓慢吸走。

4、孔板选择：因为 6 孔板大小适中，可保证有相当距离的平直划痕，便于观察，故一般选择 6 孔板；当然若是需要高通量初筛时，也可以用 12 或 24 孔板。

5、细胞的接种密度原则一般是过夜为 100% 融合，若过夜后细胞未 100% 融合，虽可以适当延长培养时间，但因细胞密度已经很大，所以细胞状态会逐渐变差，后续细胞可能不迁移而是凋亡。

6、降低细胞增殖对迁移造成的假阳性结果的方法：

① 使用无血清或低血清培养基（< 2%）可降低细胞增殖对实验结果的影响；

② 一般认为 24 h 为细胞的一个周期，在选取合适的时间点（6，12，24 h）检测划痕宽度时，最好不要超过细胞一个周期的时间；

③ 如果要单纯考虑细胞迁移，可以先用丝裂霉素（1 μg/ml）处理 1 h，抑制细胞的分裂。

7、确保拍照的观察点固定：按照 6 孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，划痕一次与 5 条定位线相交，就有 10 个可固定监测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。